1 材料

Trizol（Invitrogen）；熒光定量 PCR 儀（Thermo 公司）；普通 PCR 儀（杭州晶格科學(xué)儀器有限公司）； 逆 轉(zhuǎn) 錄 試 劑 盒（RevertAidTM first Strand cDNA Synthesis Kit）（Thermo 公司）；AMPKα2 試劑盒（北 京博奧森生物技術(shù)有限公司）；β-Actin（北京中杉）； Western- 抗 二 抗 去 除 液（Beyotime）；QuantiFast SyBr Green PCR kit（Qiagen）；引物合成（生工生物工程上海股份有限公司）；預(yù)染蛋白 Marker； VE-180 型電泳槽；VE-186 型轉(zhuǎn)膜儀（Tanon）；高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)（安徽嘉文儀器裝備有限公 司）；EPS 300 型 電 泳 儀（Bioworld Tanon）；LX 300 型微量離心機(jī)（海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限 公司）；PVDF 膜（Millipore）；電熱恒溫箱 DNP9052BS- Ⅲ（上海三發(fā)）；生物信號(hào)采集系統(tǒng)（成都 泰盟科技有限公司 BL-420S 生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)）。

2 方法

取梗死 區(qū)心肌組織 100 mg，放入添加 RIPA 細(xì)胞裂解液，冰 上勻漿，離心取上清液，BCA 試劑盒測(cè)量各組樣品 總蛋白濃度。將蛋白樣品與 5xSDS-PAGE 蛋白上樣緩 沖液均勻混合，熱水浴 5 min。經(jīng) SDS-PAGE 行凝膠 電泳，轉(zhuǎn) PVDF 膜，加入 Western 封閉液室溫封閉 2 h。 參考說(shuō)明書(shū)一抗 4 ℃孵育過(guò)夜，二抗孵育 2 h，洗膜 后置于暗室曝光、顯影，最后使用 Image J 軟件分析 顯影條帶，以目的蛋白與 GAP-DH 條帶灰度值比值 作為 AMPK 蛋白的相對(duì)表達(dá)量。采用 SPSS 18.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。連續(xù)型變量 以均數(shù) ± 標(biāo)準(zhǔn)差（x ± s）表示，多組之間均數(shù)比較 采用單因素方差分析，方差齊時(shí) 2 組之間均數(shù)比較 采用SNK法，方差不齊時(shí)采用Dunnett法，以P ＜0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

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