動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病( ASCVD) 被稱為“發(fā)達(dá) 國(guó)家居民健康的頭號(hào)殺手”,在發(fā)展中國(guó)家的發(fā)病率也 日趨增高 。血小板的粘附、活化和聚集在 ASCVD 的病 理生理過(guò)程中起重要作用。常用抗血小板聚集藥物阿司 匹林是防治 ASCVD 的基石。2006 年,美國(guó)預(yù)防服務(wù)工 作組將服用阿司匹林作為心血管疾病高危人群成本效 益和臨床價(jià)值較高的預(yù)防措施 。但部分患者服藥后出 現(xiàn)阿司匹林抵抗( AR) ,發(fā)生率為 5. 5% ~ 60% 。AR 受 遺傳、細(xì)胞和臨床等多方面因素影響,目前有多種單核 苷酸多態(tài)性( SNP) 被報(bào)道與 AR 相關(guān),如環(huán)氧合酶 - 1 ( COX - 1) 基因多態(tài)性、血小板糖蛋白( GP) Ⅱb /Ⅲa 基 因多態(tài)性、二磷酸腺苷( ADP) 受體 P2Y1 基因多態(tài)性、 血小板糖蛋白Ⅰa /Ⅱa 受體基因多態(tài)性等。
1 資料與方法
1.1 研究對(duì)象
選取醫(yī)院心血管內(nèi)科 2018 年 4 月至 9 月收治的 需口服阿司匹林治療的 ASCVD 患者 358 例( 年齡 18 ~ 80 歲,性別不限) 。排除有阿司匹林禁忌證,3 個(gè)月內(nèi)發(fā) 生過(guò)腦出血,1 個(gè)月內(nèi)進(jìn)行過(guò)重大手術(shù),以及嚴(yán)重感染、 惡性腫瘤和免疫系統(tǒng)疾病患者。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理 委員會(huì)批準(zhǔn),患者簽署知情同意書。
1.2 儀器與試藥
儀器: Fluotec 48E 型微量熒光檢測(cè)儀( 西安天隆科 技 有限 公 司) ; Sorvall TM LegendTM Micro 17R 型 離 心機(jī) ( Thermo Scientific 公司) ; LX - 300 型迷你離心機(jī)和 Vortex - 5 漩渦混合器( 海門其林貝爾儀器制作有限公司) 。 試藥: 阿司匹林腸溶片 (Bayer Vital GmbH,進(jìn)口藥 品注冊(cè)證號(hào) H20130339,規(guī)格為每片 100 mg)。測(cè)序反應(yīng) 通用試劑盒( 北京華夏時(shí)代基因科技發(fā)展有限公司) 。
1.3 阿司匹林抗血小板藥效相關(guān)基因多態(tài)性檢測(cè)
采集患者靜脈血 2 mL,置乙二胺四乙酸( EDTA) 抗 凝管中,經(jīng)裂解、結(jié)合、洗滌、洗脫、純化,得樣本 DNA 片 段,然后經(jīng)聚合酶鏈反應(yīng)( PCR) 進(jìn)行擴(kuò)增,通過(guò)焦磷酸 測(cè)序法測(cè)定基因多態(tài)性。
1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
采用 SPSS 24. 0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析。正態(tài)分布的連續(xù)性變量以 X ± s 表示,行雙側(cè) t 檢驗(yàn); 計(jì)數(shù)資料以百分率 (% )表示,行 χ 2 檢驗(yàn)。P <0. 05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
358 例患者中,GPⅢaPLA2( T > C) 基因均為野生 型,無(wú)突變; PEAR1( G > A) 基因野生( GG) 型 111 例,突 變雜合( GA) 型 180 例,突變純合( AA) 型 67 例,突變率 68. 99% ; PTGS1( - 842A > G) 基因野生( AA) 型 356 例, 突變雜合( AG) 型 2 例,突變率 0. 56% ; GP1BA( 5792C >T) 基因野生( CC) 型 307 例,突變雜合( CT) 型 48 例,突變 純合( TT) 型 3 例,突變率 14. 25% 。詳見(jiàn)表 1。
統(tǒng)計(jì)患者基因型時(shí),排除 2 例 PTGS1 位點(diǎn)突變雜合 型,基于 GPⅢа PLA2 和 PTGS1 均為野生基因型,依據(jù) PEAR1 和 GP1BA 基因型分組。PEAR1 基因野生型 111 例 ( 31. 18% ) ,突變型 245 例( 68. 82% ) ,GP1BA 基因野生型 305 例( 85. 67% ) ,突變型 51 例( 14. 33% ) 。納入患者按基 因型的不同分組,野生組與突變組患者一般資料比較,差 異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義( P >0. 05) ,具有可比性。
3 討論
阿司匹林是治療和預(yù)防心腦血管疾病的主要藥物, 但部分患者即使規(guī)律服用阿司匹林仍會(huì)發(fā)生 AR。目前, AR 的發(fā)生機(jī)制尚未研究清楚,以往研究提示,抗血小板 藥物代謝及作用過(guò)程中涉及的相關(guān)基因多態(tài)性可能是 重要因素。研究較多的阿司匹林代謝相關(guān)基因有 COX、 血小板膜糖蛋白、PEAR1 及 PTGS1 等。血 GP 受體 GPⅢa 基因外顯子 2 第 1 565 位基因 突變后,GPⅢa 蛋白 33 位點(diǎn)亮氨酸( PLA1) 被脯氨酸 ( PLA2) 置換,影響血小板的最終激活。SZCZEKLIK 等監(jiān)測(cè)了攜帶 PLA 等位基因的 80 名健康男性服用阿司 匹林前后出血時(shí)間的改變,結(jié)果攜帶 PLA2 等位基因的 人 出 血 時(shí) 間 較 攜 帶 PLA1 等 位 基 因 者 短 ,提 示 攜 帶 PLA2 等 位 基 因 者 更 易 發(fā) 生 AR。GPIb 是 由 GPIbα 和 GPIbβ 2 個(gè)亞基構(gòu)成,其表達(dá)減少會(huì)引發(fā)血小板的聚集 和釋放。FUJIWARA 等發(fā)現(xiàn),在 110 例健康男性受試 者中,血小板膜 GP1bα 多肽( GPIBA) 基因型為CC 或 CT 的,與基因型為 TT 的相比,AR 風(fēng)險(xiǎn)增加。