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其林貝爾

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其林貝爾分析大鼠體內的藥代動力學影響

返回列表 來源:未知 發(fā)布日期:2019-10-25 10:04【

葛根素是野葛的主要成分,主要用于高血壓和冠 心病 等 的 治 療。葛根素難溶于水,生物 利 用 率 低。甘草的主要活性成分是甘草酸,甘草酸有 2 種 構型,即 18α - 甘草酸和 18β - 甘草酸。本實驗 研究這 2 種構型的甘草酸對葛根素在大鼠體內藥代動力學的影響。

材料與方法

1 材料

動物 雄性 SD 大鼠,體重 180 ~ 200 g,由北京維 通利華實驗動物技術有限公司提供。動物許可證號: SYXK( 冀) 2005 - 0038。 藥品與試劑 葛根素對照品,規(guī)格: 每支 20 mg, 批號: 110752 - 200809,由中國食品藥品檢定研究院 提供; 肝素鈉注射液,規(guī)格: 每支 2 mL /1. 25 × 104 U, 批號: 20100416,江蘇萬邦生化有限公司生產; 18 - α 甘 草 酸 和 18 - β 甘 草 酸,純 度: ≥ 90% ,批 號: 20100321,南京澤朗藥業(yè)有限公司生產。甲醇,美國 Fisher Chemicals 公司生產; 羧甲基纖維素鈉,國藥集 團化學試劑有限公司生產。 儀器 高效液相色譜儀,美國安捷倫公司產品; 旋渦混合器VORTEX-5,海門市其林貝爾產品。

2 實驗方法

2. 1 葛根素血藥濃度方法的建立

2. 1. 1 色譜條件

色譜柱: Diamonsil C18 ( 250 mm × 4. 6 mm,5 μm) , 流動相: 甲醇 - 水( 30∶ 70) ,檢測波長: 250 nm,流速: 1. 00 mL·min - 1,柱溫: 30 ℃,進樣量: 10 μL。

2. 1. 2 對照品溶液的制備

將葛根素對照品 4 mg 置于 50 mL 的容量瓶中, 加甲 醇 溶 解 并 稀 釋 至 刻 度,搖 勻,制 成 濃 度 為 80 μg·mL - 1對照品儲備液備用。

2. 1. 3 標準曲線的制備

取上述儲備液,用甲醇配制成質量濃度為 2,4,8,16,20,40,80 μg·mL - 1的系列標準溶液。取上述系 列標準溶液 10 μL,分別加入大鼠空白血漿 200 μL, 得到質量濃度分別為 0. 1,0. 2,0. 4,0. 8,1. 0,2. 0, 4. 0 μg·mL - 1的標準血漿樣品系列。按照“血漿預處 理方法”進行處理,然后將處理好的上述血漿樣品依 次進樣 10 μL,測定峰面積。以峰面積( Y) 對血漿濃 度( X) 進行線性回歸,建立標準曲線。

2. 1. 4 專屬性取空白血漿加入葛根素對照品儲備液

制成葛根 素的血漿樣品,按“血漿預處理方法”進行處理后,在 上述色譜條件下分別進樣觀察。

2. 1. 5 精密度與回收率

取上述對照品儲備液分別配制成 3 種質量濃度 ( 0. 1,0. 8,4. 0 μg·mL - 1 ) 的葛根素樣品溶液,按照 “血漿預處理方法”進行處理后,分別進樣 10 μL,測 定峰面積,分別于日內進樣 5 次,考察日內精密度; 每 天同一時間進樣 1 次,共進樣 5 d,考察日間精密度。 另取血漿樣品,分別配制成 3 種質量濃度( 0. 1,0. 8, 4. 0 μg·mL - 1 ) 的葛根素樣品溶液,按照“血漿預處理 方法”進行處理后,分別進樣測定峰面積,以兩者峰面 積相比,計算出葛根素在血漿提取中的絕對回收率。

2. 1. 6 穩(wěn)定性實驗

取大 鼠 空 白 血 漿 2. 0 mL,加入質量濃度為 0. 1 mg·mL - 1葛根素甲醇溶液 20 μL,血漿中葛根素 的質量濃度為 1. 0 μg·mL - 1,平行取 8 份,于 - 20 ℃ 冷凍保存。分別于 0,12,24,48,72,120,144,168 h, 按“血漿樣預處理方法”處理樣品,進行 HPLC 測定。

2. 2 動物實驗

2. 2. 1 分組、給藥與取樣

按照體重將雄性 SD 大鼠隨機分為 3 組: 聯(lián)合 α 組、聯(lián)合 β 組和葛根素組,每組 7 只。 聯(lián)合 α 組灌胃甘草酸二銨,聯(lián)合 β 組給予甘草酸 單銨,給藥量為 150 mg·kg - 1,給藥誘導 7 d; 葛根素組 自由進食,第 7 天 3 組均灌胃葛根素 100 mg·kg - 1。00 min,于大鼠眼球后靜脈叢取血。

2. 2. 2 血漿樣品預處理方法的確定

將大鼠全血置于涂有肝素抗凝劑的離心管中,以 1. 2 × 104 r·min - 1離心 5 min。取上清 200 μL,置于 1. 5 mL 的離心管中,加入甲醇 800 μL,密塞。經(jīng) 0. 45 μm 的微孔濾膜過濾后,取上清液。

3 統(tǒng)計學處理

用 3P97 藥代動力學軟件進行分析,計量資料以 x珋± s表示,多組間比較用單因素方差分析,兩兩比較用 LSD 檢驗。

結 果

1 方法學評價

1. 1 專屬性

葛根素與內標的保留時間分別為 13. 34 和 5. 91 min,表明血漿中內源性物質不干擾葛根素和內標的 測定。結果見圖 1。

1. 2 標準曲線方程

Y = 38. 26X + 0. 97,r = 0. 999 5。葛根素血漿質量 濃度在 0. 1 ~ 4. 0 μg·mL - 1內線性關系良好。

1. 3 精密度與回收率

結果見表 1,表明該方法可滿足生物樣品分析 要求。1. 4 穩(wěn)定性 在 - 20 ℃、7 d 內,葛根素在大鼠血漿中,含量幾 乎無變化,說明葛根素在大鼠血漿中的穩(wěn)定性好。

2 藥代動力學參數(shù)

葛根素、聯(lián)合 α 組和聯(lián)合 β 組的大鼠體內藥代動 力學過程均符合兩房室模型。聯(lián)合 α 組與葛根素組 比較,AUC、t1 /2α、t1 /2β和 Cmax均明顯增加,差異均有統(tǒng) 計學意義( 均 P < 0. 05) ; 聯(lián)合 β 組與葛根素組比較, AUC、t1 /2α、t1 /2β和 Cmax均明顯降低,差異均有統(tǒng)計學意 義( 均 P < 0. 05) 。結果見表 2。



討 論

本實驗中,血漿樣品經(jīng)多次實驗,最后選用甲醇 來沉淀血漿中的蛋白,葛根素提取率較高,處理后的 血漿樣品可直接進樣測定; 同時,血漿中內源性物質 及代謝物產物對葛根素的測定不干擾,具有專屬性 高、準確度好、回收率高和簡便快速的特點,可用于葛 根素藥代動力學的研究。

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