白芍-柴胡藥對出自 《太平惠民和劑局方》，是臨床常 用的藥對組合。隨著中醫(yī)藥現(xiàn)代化的發(fā)展，組分配伍逐漸 成為現(xiàn)代中藥配伍研究的熱點。柴胡皂苷是柴胡的主要生 物活性成分，具有解熱、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、保肝、護腎、 抗腫瘤等藥理活性，臨床上以保肝作用效果最佳，這與 柴胡疏肝解郁功效一致。白芍的藥效成分主要為一組糖苷 類物質(zhì)，包括芍藥苷、芍藥新苷和芍藥內(nèi)酯苷等，統(tǒng)稱為 白芍總苷。白芍總苷具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜、抗炎、保肝、免 疫調(diào)節(jié)、抗氧化和抗心肌缺血等藥理作用，已經(jīng)作為抗 炎免疫調(diào)節(jié)藥被正式批準生產(chǎn)上市。

1 材料 

1. 1 藥 物 柴 胡 皂 苷

( 柴胡總皂苷粗提物，批 號 HY20150510，規(guī)格 50%，西安皓源生物技術(shù)有限公司，臨 用時用蒸餾水稀釋成所需濃度的混懸液) ; 白芍總苷 ( 本 實驗室自制所得，其中芍藥內(nèi)酯苷含有量 15. 2%，芍藥苷 含有量 42. 6%，使用前用蒸餾水溶解并稀釋至所需濃度) ， 苯巴 比 妥 鈉 注 射 液 ［天津金耀藥業(yè)有限 公 司，批 號 1601041 ( A1) ，規(guī)格 0. 1 g /mL］。

1. 2 動物

雄性 SD 大鼠，清潔級，體質(zhì)量 ( 180±20) g，由河北省實驗動物中心提供，實驗動物生產(chǎn)許可證 SCXK ( 冀) 2013-1-003，合格證編號 1604066，實驗動物使用許 可證 SYXK ( 冀) 2011-0047。飼養(yǎng)于河北省中藥配方顆粒 工程技術(shù)研究中心動物室，動物室為萬級潔凈屏障系統(tǒng)， 恒溫恒濕 ( 室溫 22 ～ 25 ℃，相對濕度 45% ～ 55%，明暗交 替各 12 h) ，大鼠自由攝食飲水。嚴格按照實驗動物的要求 及實驗動物飼養(yǎng)規(guī)則飼養(yǎng)和管理。

1. 3 試劑

谷丙轉(zhuǎn)氨酶 ( ALT) 、谷草轉(zhuǎn)氨酶 ( AST) 、超 氧化物歧化酶 ( SOD) 、丙二醛 ( MDA) 及 BCA 蛋白濃度 測試 盒 ( 南京建成生物工程研究所，批 號 20170603、 20170530、20170803、20170806、20170425 ) ; 氯 唑 沙 宗 ( 含有量＞ 98. 0%，批號 8SB8A-LR，東京化成工業(yè)株式會 社) ; 非那西丁 ( 含有量＞99. 0%，批號 IL7FG-PD，上?；? 成工業(yè)發(fā)展有限公司) ; 甲苯磺丁脲 ( 含有量 97. 5%，批 號 L220Q60，北京百靈威科技有限公司) ; 氨苯砜 ( 含有量 99. 5%，批號 SZBD156XV，Sigma 公司) ; 東莨菪內(nèi)酯 ( 含 有量＞98. 0%，批號 151208，成都普菲德生物技術(shù)有限公 司) ; β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸二鈉鹽 ( NADP) ( 批 號 L9A0N17，美 國 Sigma 公 司) 、葡 萄 糖-6-磷 酸 脫 氫 酶 ( G-6-PDH) ( 批號 LR60Q94，北京百靈威科技有限公司) ; 葡萄糖-6-磷酸 ( G-6-P) ( 批號 L490O130，北京百靈威科 技有限公司) ; 甲醇、乙腈為色譜純; 超純水由 Milipore 超 純水系統(tǒng)制備; 其他試劑均為分析純。

1. 4 儀器

ST-360 酶聯(lián)免疫檢測儀 ( 上?？迫A生物工程 股份有 限 公 司) ; AU2700 型全自動生化分析儀 ( 日 本 Olympus公司) ; LC-15C 高效液相色譜儀 ( 日本島津公司) ; LC-15C 泵、SPD-15C 型 紫 外 檢 測 器、SIL-10AF 自 動 進 樣 器、CTO-15C 柱溫箱 ( 日本島津公司) ; Optima XPN -100 Ultracentrifuge 超高速冷凍離心機 ( 美國 Beckman 公司) ; H2050R 高速離心 機 ( 湖南賽特湘儀離心機儀器有限公 司) ; MS-100 恒溫混勻儀 ( 杭州奧盛儀器有限公司) ; QL901 型渦旋混合器 ( 海門市其林貝爾儀器制造) ; TB-215D 電子天平 ( 德國賽多利斯公司) ; PRO200 型手持式勻漿器 ( 美國 PRO 公司) 。

2 方法

2. 1 分組、給藥

SD 大鼠 50 只，雄性，適應(yīng)性飼養(yǎng) 7 d 后，按體質(zhì)量隨機分為空白對照組、柴胡皂苷組、白芍總 苷組、柴胡皂苷-白芍總苷配伍組、苯巴比妥鈉組，每組 10 只。其中空白對照組灌胃給予相同體積的 0. 9%氯化鈉溶 液; 苯巴比妥鈉組給藥劑量為 80 mg /kg，腹腔注射給藥， 1 次/d，連續(xù) 4 d; 柴胡皂苷組、白芍總苷組給藥劑量均為 500 mg /kg ( 其劑量是依據(jù)臨床使用劑量放大 4 ～ 5 倍，并 折算成大鼠的等效劑量) ; 柴胡皂苷-白芍總苷配伍組給藥 劑量 為 500 mg /kg ( 柴 胡 皂 苷、白芍總苷配伍比例為 1 ∶ 1) ，灌胃給藥，連續(xù) 15 d。

2. 2 肝臟指數(shù)測定

大鼠末次給藥禁食、自由飲水 24 h 后，稱量每只大鼠的體質(zhì)量，處死并開腹取出肝臟，進行 肝臟形態(tài)的大體觀察，4 ℃ 生理鹽水去除肝臟表面殘血，用濾紙吸干水分后稱定質(zhì)量，計算肝臟指數(shù)。肝臟指數(shù) = ［大鼠肝臟質(zhì)量 ( g) /大鼠的體質(zhì)量 ( g) ］ ×100%。

2. 3 對大鼠肝微粒體 CYP450 亞酶活性的影響

制備大鼠肝微粒體前，將所用 試劑和器械置于 4 ℃ 以下預(yù)冷。按照差速離心法制備大鼠 肝微粒體，取適量肝臟稱重，立即置于冰冷的蔗糖溶液 中清洗，剪碎，反復(fù)清洗至土黃色; 然后加 4 倍肝重的蔗 糖溶液，在冰浴中用組織勻漿器制成勻漿; 在 14 000 g、 4 ℃離心 20 min; 棄去沉淀，上清液在 4 ℃以下 100 000 g， 離心 60 min; 棄去上清液，沉淀懸浮于含 20%甘油的 TrisHCl 緩沖液 ( 0. 1 mol /L Tris) 中，反復(fù)在冰水浴中吹打均 勻，分裝，－80 ℃保存?zhèn)溆谩Ｓ?BCA 試劑盒測定肝微粒體 蛋白濃度。

3 結(jié)果

在給藥 15 d 后， 各組大鼠體質(zhì)量變化無明顯差異 ( P＞0. 05) 。與空白對照 組相比，除苯巴比妥組大鼠肝臟指數(shù)顯著升高 ( P＜0. 01) 外，其他各給藥組無明顯差異 ( P＞0. 05) 。見表 1。

與空白對照組比 較，柴胡皂苷組、白芍總苷組及柴胡皂苷-白芍總苷配伍組 肝組織中 MDA 水平顯著增高 ( P＜ 0. 05) ，肝組織中 SOD水平顯著降低 ( P＜0. 05) ，提示柴胡皂苷與白芍總苷所致 肝功損傷與氧化損傷機制有關(guān)。

4 討論 

中藥成分復(fù)雜，若采用飲片進行藥理研究干擾因素很 多，組分配伍不僅是現(xiàn)代中藥配伍研究的熱點，也可在實 驗研究中減少影響因素的干擾。肝臟是藥物代謝的主要器官，其中細胞色素 p450 酶系統(tǒng) ( CYP450) 是多種藥物在 體內(nèi)代謝的主要酶系。CYP450 酶的活性直接影響藥物清 除，國內(nèi)外均要求測定藥物對 CYP 酶活性的影響，作為臨 床合理聯(lián)合用藥的依據(jù)。

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