1 材料
QIAGEN OneStep RT-PCR Kit、QIAamp? Viral RNA mini Kit(52904)、RNeasy? Mini Kit (74104),均購自 QIAGEN 公司;2×SmartHyb 雜交液,購自北京美萊博醫(yī)學(xué)科技有限公司;雜交 圍欄,購自博奧(北京)生物技術(shù)有限公司。通用 引物 Uf:TCACTTGCTTCCGTTGAGG;通用引物 Ur:TAMRA-GGTTTCGGATGTTACAGCGT。 引 物均由上海生工生物公司合成。 高速微量離心機(jī)(Sigma,USA);水浴鍋 (PolyScience,美國);渦旋儀(江蘇海門市其林貝爾公司);生物安全柜(NU,美國);恒溫 鼓風(fēng)干燥箱(中國智成);Eppendorf Mastercycler PCR 儀(Eppendorf AG,德國);PerkinElmer ScanArray Gx plus(PE,美國)。
2 方法
取擴(kuò)增產(chǎn)物 5.2 μL、雜交質(zhì)控探針 0.8 μL 和 2×SmartHyb 雜交液 6 μL 于 0.2 mL PCR 管中,混 勻;95 ℃變性 5 min,立即冰浴 3 min,4 000 r/min 離心 5~10 s,然后將離心管放回冰?。辉陔s交盒的 溝槽中加入 200 μL 蒸餾水,以防止雜交體系蒸發(fā), 然后將芯片正面向上放入盒中;將已變性的雜交樣 品從冰盒中取出,用槍頭輕輕吹吸 3~5 次后,取 7 μL 雜交混合液加到探針點(diǎn)陣區(qū),迅速蓋上蓋片 和雜交盒并密封;將雜交盒水平放入 52 ℃的水浴 鍋中,雜交 2.5 h。
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