材料與方法
乙腈( 質(zhì)譜級,美國 Fisher 公司,批號: 142146) 、甲酸( 質(zhì)譜級,美國 Fisher 公司, 批號: 140362) ,蒸餾水( 屈臣氏) 。美國 UPLC - Q - TOF 儀( Waters,SYNAPT G2 UPLC - Q - TOF) ; VOR - TEX - 5 渦旋混合器( 江蘇海門其林貝爾儀器制造有 限公司) ; MIKR022R 臺式高速冷凍離心機 ( LAB - WAYSCIENCE,德 國) 。實 驗 用 藥: 鹽 酸 克 林 霉 素 ( CAS321462 - 39 - 5,UPS 級,83% ,800 μg /mg) ; 大黃( 產(chǎn)地: 甘肅) 購于北京中醫(yī)藥大學東方醫(yī)院中藥房。
代謝組學檢測
與空白對照組大鼠比較, AAD 組大鼠大便次數(shù)增多、大便稀薄,毛失去光澤,活 動減少,肛周有污物,便涂片示球菌/桿菌比異常; 脾陽 虛證組大鼠,神疲乏力,反應(yīng)遲鈍,行動緩慢,被毛蓬起 無光澤,弓背、扎堆,肛溫下降、便溏,肛周污穢,毛色枯 槁無光澤。兩組造模均成功。分析前,將凍存的血清于 37 ℃ 復融 2 min,各取 200 μL 血清于 EP 管,加入 600 μL 乙 腈,渦旋 10 min。4 ℃ 下 12 000 r/min 離心 10 min 去 除蛋白。吸取上清液 700 μL 于新的 EP 管,氮氣吹干, 樣品保存于 - 20 ℃冰箱冷藏,待檢測。各血清樣品分 別抽取 40 μL 混勻通過上述制備方法得到質(zhì)量控制 ( QC) 樣品。氮氣吹干的樣品,分別加入 10% 乙腈 200 μL 于 EP 管復溶,4 ℃ 下 12 000 r/min 離心10 min,取 上清液 150 μL 于進樣小管,等待進樣。
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