職業(yè)病危害仍然是我國目前嚴(yán)重影響勞動者 活動能力及導(dǎo)致勞動力喪失的主要原因，其中以矽 肺最為嚴(yán)重，占到塵肺總病例近 50% ，平均以每年 超過萬例的速度在增長［1］。矽肺是由于長期吸入 游離二氧化硅( Si02 ) 含量較高的粉塵，達(dá)到一定量 后所引起的以肺間質(zhì)纖維化為主的全身性疾病，其 病理改變?yōu)榉螕p傷、肺纖維化、矽結(jié)節(jié)形成。然而 矽肺的發(fā)病機理仍然不完全清楚，無早期診斷的特 異性指標(biāo)，也無特異性的治療藥物和方法，一經(jīng)確 診，肺部病變則已經(jīng)難以逆轉(zhuǎn)。

清潔級 1. 5 月齡雄性 SD 大鼠，體 質(zhì)量( 200 ± 10) g，購自南京醫(yī)科大學(xué)，生產(chǎn)許可證: SCXK( 蘇) 2016 － 0002，籠中鼠顆粒飼料飼養(yǎng)，自由 飲食，適應(yīng)性飼養(yǎng) 1 周。

虎杖: 購自杭州市紅十字會醫(yī)院中藥房。伊紅: 國藥集團( 71014544) ; 蘇木素: Sigma ( H9627 ) ; 天 狼 星 紅 染 液: YEASEN ( 36324ES60) ; Trizol: Invitrogen( ( 15596 － 018) ; Anti － bFGF antibody，: Affinity ( DF6038 ) ; Anti － PDGF antibody: Affinity( AF5179) ; Anti － TNF － α antibody: Affinity( DF6080) ; Anti － GAPDH antibody: Bioworld ( AP0063) 。

JT － 12J 型 脫 水 機: 武 漢 俊 杰; 100 型顯微鏡: 尼康; 9700 型 PCＲ 儀、7900 / Viia7 型實時熒光定量 PCＲ 儀 : ABI; Multiskan Spectrum 型酶 標(biāo) 儀、CO2 細(xì) 胞 培 養(yǎng) 箱: Thermo Scientific; 5702Ｒ 型低速離心機: Eppendorf; H1650Ｒ 型高速冷 凍離心機: 上海盧湘儀。

12 只大鼠隨機 分為模型組、對照組，每組 6 只，模型建立后，各組于 第 7、14、21 天 3 個時間點分別取 2 只大鼠將其處 死，取肺組織行常規(guī) HE 染色，及 I、III 型膠原行天 狼猩紅染色確定矽肺的病理分期情況，進行后續(xù)實 驗。將 50 只健康雄性 SD 大鼠隨機等分為 5 組，即 正常 組，模 型 組，虎 杖 低、中、高 劑 量 組，每 組 各 10 只。大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，75% 酒精消 毒大鼠頸部皮膚，眼科剪沿中線剪開約 1. 2 cm 長切口，暴露氣管后，吸取 1 mL SiO2 粉塵懸液，經(jīng)軟骨 間隙注射到氣管內(nèi)，將肌肉及皮下組織復(fù)位，縫合 皮膚并消毒。選擇在矽肺早期( 第 7 ～ 21 天) 進行 如下處理 14 d: 正常組: 等量生理鹽水灌胃，每天 1 次; 模型組: 等量生理鹽水灌胃，每天1 次; 虎杖低 劑量組: 3. 0 mg / kg 虎杖水煎液灌胃，每天 1 次; 虎 杖中劑量組: 6. 0 mg / kg 虎杖水煎液灌胃，每天1 次; 虎杖高劑量組: 15. 0 mg / kg 虎杖水煎液灌胃，每天 1 次。在電泳即將結(jié)束 前，預(yù) 先 將 PVDF 膜 浸 泡 在 甲 醇 中 15 s，然 后 用 ddH2O 漂洗 2 min，浸泡于轉(zhuǎn)移緩沖液中 5 min 后開 始后續(xù)操作; 在水中撬膠，修膠后將膠浸泡于轉(zhuǎn)移 緩沖液中平衡 15 min; 按黑面( 負(fù)極) →海綿→濾紙 →膠→PVDF 膜→濾紙→海綿→紅面( 正極) 的順序制備轉(zhuǎn)膜“三明治”，每層鋪好后先趕走氣泡再鋪另 一層。在轉(zhuǎn)移緩沖液中制備三明治可避免氣泡的 產(chǎn)生; 接上正負(fù)極，按膜向正極的方向?qū)⑥D(zhuǎn)移盒放 入電轉(zhuǎn)儀中，加入轉(zhuǎn)膜緩沖液; 將電轉(zhuǎn)儀置于冰水 中，100 V 恒 壓 轉(zhuǎn) 膜 1 h; 轉(zhuǎn) 膜 結(jié) 束 后，快 速 取 出 PVDF 膜，放入 5% BSA 室溫封閉 2 h; 取出膜，于脫色搖床（TS-1000型）上用 TBST 洗膜 5 min × 3 次; 孵育袋中加入 TBST 稀釋的 bFGF( 1∶ 500) 、PDGF( 1∶ 500) 、TNF － α( 1∶ 500) 和 GAPDH( 1∶ 5000) 4 ℃ 孵育過夜; TBST 洗膜 5 min × 3 次，辣根過氧化物酶( HＲP) 標(biāo)記的二抗 ( 1∶ 3000) ，室溫孵育 1 h; TBST 洗膜 10 min × 3 次。 膜于化學(xué)發(fā)光檢測試劑反應(yīng)至暗處出現(xiàn)亮條帶，取 出膜，甩去多余的液體，用保鮮膜包好 PVDF 膜，暗 室中用 X 膠片感光、顯影、定影。

預(yù)實驗結(jié)果顯示， 在第 7 天時，模型組大鼠肺泡壁增厚，并開始有少量 炎細(xì)胞浸潤，并有細(xì)胞性矽結(jié)節(jié)出現(xiàn)，表明大鼠矽 肺模型開始進入Ⅰ期階段; 在第 14 天時，肺泡間隔 增寬，肺泡間隔出現(xiàn)斷裂，且有明顯的炎細(xì)胞浸潤， 細(xì)胞性矽結(jié)節(jié)增多，表明大鼠矽肺模型仍處在在 Ⅰ期階段，但比在第 7 天時嚴(yán)重; 在第 21 天時，細(xì)胞 性矽結(jié)節(jié)形成增多，肺組織有少量成纖維細(xì)胞增 生，偶見纖維性結(jié)節(jié)，肺泡間隔斷裂嚴(yán)重，表明大鼠 矽肺具備Ⅰ期、Ⅱ期的一些特點。HE 染色結(jié)果: 正 常對照組大鼠肺組織結(jié)構(gòu)清晰，肺泡壁薄，結(jié)構(gòu)正 常，周圍未見明顯的炎細(xì)胞浸潤; 模型組大鼠肺泡 壁增厚，肺泡間隔增寬，肺泡間隔出現(xiàn)斷裂，且有明 顯的炎細(xì)胞浸潤; 而虎杖各劑量組，隨著虎杖劑量 的升高，炎細(xì)胞、肺泡壁增厚現(xiàn)象明顯減少，肺泡間 隔有明顯的恢復(fù)變窄。

矽肺的病情發(fā)生發(fā)展，中醫(yī)認(rèn)為本病多由外邪 襲肺，損傷肺臟，繼而累及脾腎，后期及心，終為本 虛標(biāo)實之證，引發(fā)喘促氣急的癥狀。根據(jù)中醫(yī)文獻 中有關(guān)本病癥狀的描述，不同的發(fā)病階段分別類屬 于“咳嗽”“肺痹”“肺脹”等范疇，發(fā)作時特點與中 醫(yī)學(xué)“哮證”相符，但病久燥傷肺津、肺氣虧虛，肺體痿廢不用，當(dāng)屬中醫(yī)“肺痿”范疇。但病之初，外邪 襲肺，邪毒內(nèi)陷于肺是該病病機關(guān)鍵所在。目前矽 肺引起的肺間質(zhì)纖維化尚無特效治療方法，因此若 能在發(fā)病早期找到有效靶點，阻斷疾病的進程，無 論對于患者或者臨床治療均有重大意義。

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